GB-T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法标准规定了免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骤
本标准适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。
样品中黄曲霉毒素的检出限:免疫亲和层析净化—高效液相色谱法和免疫亲和层析净化—荧光光度法为1mg/kg;免疫亲和层析净化—荧光光度法测定酱油样品中黄曲霉毒素检出限为2.5mg/kg。
免疫亲和层析净化高效液相色谱法
方法提要
试样经过甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释后,滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化,此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性,黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水或吐温/PBS将免疫亲和柱上杂质除去,以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱,洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定黄曲霉毒素的含量。
仪器和设备
实验室常规仪器、设备、材料及下列各项。
1 高速均质器:18,000 r/min ~22,000 r/min。
2 黄曲霉毒素免疫亲和柱。
3 玻璃纤维滤纸:直径11cm,孔径1.5μm。
4 玻璃注射器:10 mL,20mL。
5 玻璃试管:直径12 mm ,长75mm,无荧光特性。
6 高效液相色谱仪:具有360nm激发波长和大于420nm发射波长的荧光检测器。
7 空气压力泵。
8 微量注射器:100mL。
9 色谱柱:C18柱(柱长150 mm ,内径4.6mm,填料直径5mm)。
10柱后衍生
标准配置
荧光检测器
四元低压泵单元(带自动在线柱后清洗、在线脱气机)
宽温程带制冷柱温箱
溶剂托盘
高效液相色谱仪HPLC-3000
技术参数 :
P3000高压输液泵:
输液方式 :双柱塞往复泵,一个主吸液柱塞。一个为辅助柱塞
泵头分析型:10ml不锈钢/PEEK泵头/半制备型50ml不锈钢/PEEK泵头
最大工作压力分析型:42MPa不锈钢泵头/30MPa PEEK泵头 半制备型:30MPa不锈钢泵头/20MPa PEEK泵
流量范围分析型:0.001-9.999ml 半制备型:0.01-49.99 ml
流量精度 :RSD ≤ 0.5%(1ml/min)
流量重复性 :RSD ≤ 0.1%(1ml/min)
显示屏幕 :320*240点阵大屏幕液晶显示,可调蓝色背光。
系统保护 :慢速启动,停止低于最小压力2ML。最大最小压力可调,用户数据自动储存。
系统连接 :1/16”管线连接
控制系统
独立模式 :全键盘设定参数。工作于高压梯度模式时,其中一台泵为主泵,控制其他相同型号的高压输液泵,并通过显示器上的梯度曲线对所显示的梯度方式进行验证。 串口模式 :通过RS232口,控制高压输液泵。
注:外型尺寸:398*149*267mm 重量:10 kg 电源功率:220V ± 10%,50H Z , 40W
UV3000 检测器
波长范围/精度 :190 — 700nm ± 2nm
波长重复性 :0.4nm
灯源 :氘灯(标准配置);钨灯(可替换)
灯源控制 :可进行灯选择,灯开/关设定
扫描功能 :停留扫描,扫描可编程即扫描起点和结束点可设定,扫描步长可设定。
检测范围 :0 — 2AU
基线噪声 :1.5*10—5AU/h 动态:流速1ml/min 甲醇/水=80/20,波长254nm
基线漂移 :4*10-4AU/h 动态:流速1ml/min 甲醇/水=80/20,波长254nm
时间常数 :0.1/0.2/0.5/1/2/5/10S
模拟信号 :± 0.1V ± 1.0V ± 10V
积分输出 :16级可调
自动调零 :满量程
控制
独立模式:全键盘设定参数。 串口模式:通过RS232口,控制高压输液泵。
显示屏幕 :320*240点阵大屏幕液晶显示,可调蓝色背光。
GLP :总的点灯时间,点灯次数。更换灯数及产品系列号等
注:外型尺寸:398*149*267mm 重量:10 kg 电源功率:220V ± 10%,50H Z , 40W